Invitrogen™ GeneArt™ Type IIs Assembly Kit, Aar I

El kit de ensamble tipo IIs GeneArt™ utiliza una tecnología similar a la clonación Golden Gate y se puede utilizar para ensamblar varios fragmentos en un orden predeterminado en cualquier vector compatible. Dado que el ensamble de tipo IIs no se basa en la recombinación homóloga, existe un riesgo mínimo de rearreglos y se requiere una confirmación mínima de la secuencia de la construcción final.

El kit se ofrece en tres versiones, cada una con una enzima de restricción de tipo IIs diferente (Aar I, Bsa I o Bbs I). Todas las versiones incluyen una mezcla de enzimas todo en uno, un vector de clonación y controles de clonación. Use nuestra herramienta de diseño de construcciones y primers GeneArt™ para determinar el kit de ensamble GeneArt™ apropiado para sus fragmentos; la herramienta proporciona una interfaz fácil de usar para diseñar su construcción y crear y ordenar imprimaciones, si fuera necesario.

• Ensamble múltiples fragmentos de ADN en cualquier orden, en cualquier vector compatible, sin marcas
• Evite la recombinación homóloga y las reordenaciones asociadas cuando clone secuencias homólogas o repetitivas
• Se usa para el ensamble de TAL, variantes de genes y secuencias repetitivas
• Cree sus propios vectores de clonación y expresión con elementos de vector personalizados
• Minimice la confirmación de secuencia de la construcción final
• Elija entre tres enzimas de tipo IIs

Clonación de tipo IIS
La clonación de tipo IIs GeneArt™ es un proceso simple, de dos pasos, que consiste en una reacción de ensamblaje in vitro seguida de la transformación en E. coli competente. La endonucleasa de restricción Aar I de tipo IIS reconoce una secuencia asimétrica de ADN y corta la molécula de ADN a una distancia definida del sitio de reconocimiento Aar I. Los extremos de su fragmento de ADN se pueden diseñar para ser flanqueados por el sitio de restricción Aar I de tal manera que la digestión de los fragmentos elimina el sitio de reconocimiento y genera salientes complementarios que pueden ligarse sin problemas, creando una unión que carece del sitio original. El kit incluye un vector de destino, denominado pTipo IIs, que está optimizado para este enfoque.

Eficacia, flexibilidad y precisión de la clonación
Con el kit de ensamble de tipo IIs GeneArt™, los principales factores que influyen en la eficacia de la clonación son el tamaño de los elementos de ADN, el tamaño total de la molécula final (10 kb) y la calidad y especificidad del fragmento.

Eficacias típicas de clonación para diferentes números de fragmentos clonados en pTipo IIs:

• >95 % para 5 fragmentos de 1 Kb cada uno
• >60% para 8 fragmentos de 1 Kb cada uno
• > 85 % para 2 fragmentos de ADN de 1 Kb cada uno

Soporte de diseño para clonación en sílice
Un paso clave en la clonación de tipo IIs GeneArt™ es el correcto diseño de fragmentos y oligonucleótidos con los sitios de reconocimiento y el espacio adecuados para ayudarle a garantizar el ensamble correcto de su clon. Con el fin de simplificar y acelerar el proceso de diseño, proporcionamos una herramienta de diseño de primers y construcciones GeneArt™ para ayudarle a diseñar su experimento en sílice. La herramienta recomienda el kit GeneArt™ correcto para su ensamble, comprueba la compatibilidad del diseño experimental con las especificaciones del producto, diseña oligonucleótidos de ADN si es necesario y ofrece al usuario una representación gráfica del vector, así como una secuencia anotada descargable en formato GenBank, compatible con el software VectorNTI™.

Otros productos recomendados:

• Kit de clonación de PCR Zero Blunt™ TOPO™, sin células competentes (n.º de referencia de cat. 450245)
• Kit de clonación de PCR ZeroBlunt™ TOPO™, con E. coli químicamente competente One Shot™ TOP10 (n.º de referencia de cat. K280020)
• Células resistentes al fago T1 One Shot™ MAX Efficiency™ DH10B™ (n.º de referencia cat. 12331-013).

Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.