Thermo Scientific™ Ligasa de ARN T4 (10 U/μl)

• Fuente: Células de E. coli con un gen 63 clonado del bacteriófago T4
• Peso molecular: Monómero de 43,6 kDa

• Ausencia de ribonucleasas, exodesoxirribonucleasas, endodesoxiribonucleasas y fosfatasas confirmada mediante pruebas de calidad apropiadas.

• Células de E. coli con un gen 63 clonado del bacteriófago T4

Peso molecular:

• Monómero de 43,6 kDa

Definición de unidad de actividad:

• Una unidad de la enzima cataliza la conversión de 1 nmol de 5'-[³²P]-(A)_12-18 a una forma resistente a la fosfatasa en 30 min a 37 °C.
• La actividad enzimática se analiza en la siguiente mezcla: 50 mM de Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM de MgCl₂, 10 mM de DTT, 1 mM de ATP, 10 μM 5'-[³²P]-(A)_12-18 (10 μM en extremo 5')

Tampón de almacenamiento:

• La enzima se suministra en: 20 mM de Tris-HCl (pH 7,5), 1 mM de DTT, 50 mM de KCl, 0,1 mM de EDTA, 0,03 % (v/v) de detergente ELUGENT y 50 % (v/v) de glicerol

Tampón de reacción 10X:

• 500 mM de Tris-HCl (pH 7,5 a 25 °C), 100 mM de MgCl₂, 100 mM de DTT, 10 mM de ATP

Inhibición e inactivación:

• Inhibidores: quelantes de metales, reactivos de modificación del grupo SH (8).
• Inactivación por calor a 70 °C durante 10 min

Recomendada para:

Marcado del extremo 3' del ARN con citidina 3',5'-bis [alfa-³²P] fosfato (1); unión de ARN a ARN (2); síntesis de oligoribonucleótidos y oligodesoxiribonucleótidos (3, 4); modificaciones específicas de ARNt (5); ligadura de oligodesoxiribonucleótidos a ADN complementario monocatenario para 5'. RACE (Amplificación rápida de los extremos de ADN complementario) (6); generación de cebadores compuestos de sitio específico para PCR (7)

Nota:

La concentración recomendada de BSA en la mezcla de reacción es de 0,1 mg/ml.