Cataliza la formación dependiente de ATP de enlaces fosfodiéster entre los extremos 5'-fosfato y 3'-hidroxilo de oligonucleótidos, ADN y ARN monocatenario.
Marca:Thermo Scientific™
EL0021
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T4 RNA Ligase cataliza la formación intra e intermolecular dependiente de ATP de enlaces fosfodiéster entre los extremos 5'-fosfato y 3'-hidroxilo de oligonucleótidos, ADN y ARN monocatenario.
El sustrato mínimo es un nucleósido 3',5'-bifosfato en una reacción intermolecular y un oligonucleótido de 8 bases en una reacción intramolecular.
Fuente: Células de E. coli con un gen 63 clonado del bacteriófago T4
Peso molecular: Monómero de 43,6 kDa
Control de calidad:
Ausencia de ribonucleasas, exodesoxirribonucleasas, endodesoxiribonucleasas y fosfatasas confirmada mediante pruebas de calidad apropiadas.
Fuente:
Células de E. coli con un gen 63 clonado del bacteriófago T4
Peso molecular:
Monómero de 43,6 kDa
Definición de unidad de actividad:
Una unidad de la enzima cataliza la conversión de 1 nmol de 5'-[32P]-(A)12-18 a una forma resistente a la fosfatasa en 30 min a 37 °C.
La actividad enzimática se analiza en la siguiente mezcla: 50 mM de Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM de MgCl2, 10 mM de DTT, 1 mM de ATP, 10 μM 5'-[32P]-(A)12-18 (10 μM en extremo 5')
Tampón de almacenamiento:
La enzima se suministra en: 20 mM de Tris-HCl (pH 7,5), 1 mM de DTT, 50 mM de KCl, 0,1 mM de EDTA, 0,03 % (v/v) de detergente ELUGENT y 50 % (v/v) de glicerol
Tampón de reacción 10X:
500 mM de Tris-HCl (pH 7,5 a 25 °C), 100 mM de MgCl2, 100 mM de DTT, 10 mM de ATP
Inhibición e inactivación:
Inhibidores: quelantes de metales, reactivos de modificación del grupo SH (8).
Inactivación por calor a 70 °C durante 10 min
Recomendada para:
Marcado del extremo 3' del ARN con citidina 3',5'-bis [alfa-32P] fosfato (1); unión de ARN a ARN (2); síntesis de oligoribonucleótidos y oligodesoxiribonucleótidos (3, 4); modificaciones específicas de ARNt (5); ligadura de oligodesoxiribonucleótidos a ADN complementario monocatenario para 5'. RACE (Amplificación rápida de los extremos de ADN complementario) (6); generación de cebadores compuestos de sitio específico para PCR (7)
Nota:
La concentración recomendada de BSA en la mezcla de reacción es de 0,1 mg/ml.
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