Thermo Scientific™ RNasa H (5 U/μl)

Descripción

 Ribonuclease H (ARNasa H) degrada específicamente la cadena de ARN en híbridos ARN-ADN. No hidroliza los enlaces fosfodiéster dentro del ARN y ADN monocatenario y bicatenario.

• No hidroliza los enlaces fosfodiéster dentro del ARN y ADN monocatenario y bicatenario

• Ausencia de otras endo o exodesoxirribonucleasas y ribonucleasas confirmada mediante pruebas de calidad apropiadas

Fuente:

• Células E.coli MRE-600

Peso molecular:

• Monómero de 18,4 kDa

Definición de unidad de actividad:

• Una unidad de la enzima cataliza la formación de 1 nmol de productos solubles en ácido en 20 min a 37 °C.
• La actividad enzimática se analiza en la siguiente mezcla: 20 mM de Tris-HCl (pH 7,8), 40 mM de KCl, 8 mm de MgCl₂, 1 mM de DTT, 24 μm [³H]-poli(A)·poli(DT), 0,03 mg/ml de BSA, 4 % (v/v) de glicerol

• La enzima se suministra en: 25 mM de HEPES-KOH (pH 8,0), 50 mM de KCl, 0,1 mM de EDTA, 1 mM de DTT, 0,1 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Tampón de reacción 10X:

• 200 mM de Tris-HCl (pH 7,8), 400 mM de KCl, 80 mM de MgCl₂, 10 mM de DTT

Inhibición e inactivación:

• Inhibidores: quelantes de metales, reactivos de-bloqueo de SH
• Inactivación por calor a 65 °C durante 10 min

Recomendada para:

• Extracción del ARNm antes de la síntesis del ADNc de la segunda cadena (1)
• RT-PCR y qRT-PCR: extracción del ARN tras la síntesis de la primera cadena de ADNc
• Extracción de las secuencias poli(A) de ARNm después de la hibridación con oligo (dT) (2)
• Escisión específica del sitio del ARN (3)
• Estudios de productos de reacción de poliadenilación in vitro