Ambion™ Mezclas de sustancia añadida de ARN ERCC ExFold

Las mezclas de sustancia añadida de ARN ERCC ExFold proporcionan un conjunto de controles de ARN externos que permiten la evaluación del rendimiento de una variedad de plataformas tecnológicas utilizadas para experimentos de expresión génica. Agregue una mezcla de sustancia añadida a cada muestra de ARN y ejecute las muestras que contienen la mezcla de sustancia añadida en su plataforma. A continuación, compare los datos de la mezcla de sustancia añadida con las concentraciones y proporciones conocidas de mezcla de sustancia añadida para evaluar el rango dinámico, el límite inferior de detección y la respuesta de cambio de plegado de su plataforma. Varias tecnologías de expresión genética pueden beneficiarse del uso de las mezclas de ARN ExFold Spike-In de ERCC, incluida la secuenciación de próxima generación (NGS ), microarrays y ensayos basados en PCR. Las micromatrices deben contener sondas diseñadas para analizar las transcripciones de ERCC para poder beneficiarse del uso de las mezclas de sustancia añadida de ARN ERCC ExFold. Consulte al fabricante de matrices para obtener más información detallada. Características principales del producto:

Obtener una medición estándar para la comparación de datos en experimentos de expresión génica

Medir la sensibilidad (límite inferior de detección) y el rango dinámico de un experimento

Cuantificar la expresión genética

diferencial Por qué se necesitan controles de ARN externos
La variación en los datos de expresión de ARN se puede atribuir a una variedad de factores, incluida la calidad del material de partida, el nivel de celularidad y el rendimiento del ARN, la plataforma empleada y la persona que realiza el experimento. Para controlar estas fuentes de variabilidad, el Consorcio de Controles de ARN Externo (ERCC), un grupo ad hoc de organizaciones académicas, privadas y públicas auspiciado por el Instituto Nacional de Normas y Tecnología (NIST), ha desarrollado un conjunto común de controles de ARN externos. NIST ). Los controles constan de un conjunto de transcritos poliadenilados y sin marcar diseñados para añadir a los experimentos de análisis de ARN tras el aislamiento de la muestra para compararlas con un conjunto de criterios de rendimiento. Antes del diseño de estos controles universalmente aceptados resultaba difícil ejecutar una investigación exhaustiva de métricas fundamentales de rendimiento analítico. La marca de confianza en reactivos de ARN de calidad ha llevado al mercado las mezclas de control de sustancias añadidas de ERCC ExFold, así como mezclas preformuladas de 92 transcritos derivados y trazables de plásmidos de ADN certificados con la certificación NIST. Las transcripciones están diseñadas para tener una longitud de 250 a 2000 nt, que imitan a los ARNm eucariotas naturales.

Descubra el potencial del análisis de ARN El análisis
de ARN, incluido el perfil de expresión genética y el estudio del transcriptoma completo, puede conducir a una mejor comprensión de los patrones de expresión en estados patológicos y proporciona mayores conocimientos sobre las vías biológicas y los mecanismos moleculares que regulan el destino celular, el desarrollo y la progresión de la enfermedad. Los métodos tradicionales para el análisis de ARN, como la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) y los microarreglos, tienen una eficacia demostrada. En la actualidad, los sustituye la secuenciación de última generación, una alternativa digital de gran rendimiento. Debido a que cada método utiliza múltiples plataformas, y con la necesidad de comparar varias muestras a través de plataformas en todo el mundo, una medida estándar para la comparación de datos es necesaria. A medida que se amplían las capacidades del análisis de ARN, la necesidad de crear una vista estandarizada de los datos será aún más importante.

Obtenga y compare resultados con precisión confirmada. Las
mezclas de adición de ARN ExFold de ERCC se utilizan para crear una medición de referencia estándar de ARN tanto dentro de un experimento como en múltiples experimentos realizados utilizando varias muestras y plataformas. Gracias a las dos formulaciones de mezcla de sustancia añadida (véase la figura), se pueden examinar varias mediciones, como la sensibilidad y el rango dinámico, para evaluar los distintos parámetros en un experimento o varios (véase la figura). Además, las relaciones de cambio de expresión entre dos muestras se pueden calcular con un alto grado de confianza mediante la relación altamente concordante entre la sustancia añadida de ARN ExFold 1 y la sustancia añadida de ARN ExFold 2 (consulte la figura). Las mediciones se determinaron a través de concentraciones molares conocidas para cada transcripción dentro de spike-in mix y a través de asociación de las dos mezclas utilizando una combinación de relaciones a través de 4 subgrupos diferentes de los 92 transcritos. Los controles son ideales para experimentos de secuenciación de próxima generación, como en SOLiD™ Sistema y plataformas de microarrays compatibles, como el Illumina™ Sentrix™ Chip de cuentas.

Elija entre opciones flexibles para configuraciones de kit ERCC Ya
sea para medir el rango dinámico o el cambio de expresión genética, las mezclas de control ERCC Spike-In están disponibles en dos configuraciones de kit para satisfacer sus necesidades experimentales. Utilice la mezcla de control de sustancia añadida de ERCC para determinar el rango dinámico y el límite inferior de detección de la plataforma. Utilice las mezclas de sustancias añadidas de ERCC ExFold para evaluar la precisión de las mediciones de expresión génica diferencial.

	Mezcla de adición de ARN ERCC 1*	Mezcla para pinchos ExFold 1*	Mezcla para pinchos ExFold Spike-In 2*	Agua libre de nucleasas
Mezcla de ARN de ERCC (n.° de cat. 4456740)	10 μlitros	—	—	1,75 mL
Mezclas de ARN enriquecido ExFold de ERCC (n.° de cat. 4456739)	—	10 μlitros	10 μlitros	1,75 mL

*Aunque ERCC RNA Spike-In Mix 1 y ExFold Spike-In Mix 1 contienen la misma formulación de transcripciones de ERCC, no sustituya ERCC RNA Spike-In Mix 1 por ExFold Spike-In Mix 1 para la evaluación del cambio de plegamiento. Utilice solo las mezclas de sustancias añadidas ExFold 1 y 2 con el mismo número de lote de fabricación.