Ambion™ Mezclas de sustancia añadida de ARN ERCC ExFold

Las mezclas de sustancia añadida de ARN ERCC ExFold proporcionan un conjunto de controles de ARN externos que permiten la evaluación del rendimiento de una variedad de plataformas tecnológicas utilizadas para experimentos de expresión génica. Agregue una mezcla de sustancia añadida a cada muestra de ARN y ejecute las muestras que contienen la mezcla de sustancia añadida en su plataforma. A continuación, compare los datos de la mezcla de sustancia añadida con las concentraciones y proporciones conocidas de mezcla de sustancia añadida para evaluar el rango dinámico, el límite inferior de detección y la respuesta de cambio de plegado de su plataforma. Varias tecnologías de expresión génica pueden beneficiarse del uso de las mezclas de sustancia añadida de ARN ERCC ExFold, incluida la secuenciación de última generación (NGS), las micromatrices y los ensayos basados en PCR. Las micromatrices deben contener sondas diseñadas para analizar las transcripciones de ERCC para poder beneficiarse del uso de las mezclas de sustancia añadida de ARN ERCC ExFold. Consulte al fabricante de matrices para obtener más información detallada. Características principales del producto:

Obtener una medición estándar para la comparación de datos en experimentos de expresión génica

Medir la sensibilidad (límite inferior de detección) y el rango dinámico de un experimento

Expresión génica diferencial cuantitativa

¿Por qué son necesarios los controles de ARN externos?
La variación de datos en la expresión de ARN se puede atribuir a una serie de factores, incluida la calidad del material de partida, el nivel de celularidad y producción de ARN, la plataforma empleada y la persona que realiza en experimento. Para controlar estas fuentes de variabilidad, una serie de controles externos de ARN han sido desarrollados por el Consorcio de Control Externo de ARN (ERCC), un grupo ad hoc de organizaciones públicas, privadas y académicas dirigido por el National Institute of Standards and Technology (NIST, Instituto estadounidense de normas y tecnología), ha desarrollado un conjunto común de controles externos de ARN. Los controles constan de un conjunto de transcritos poliadenilados y sin marcar diseñados para añadir a los experimentos de análisis de ARN tras el aislamiento de la muestra para compararlas con un conjunto de criterios de rendimiento. Antes del diseño de estos controles universalmente aceptados resultaba difícil ejecutar una investigación exhaustiva de métricas fundamentales de rendimiento analítico. La marca de confianza de reactivos de ARN de calidad ha puesto en el mercado las mezclas de sustancias añadidas ERCC ExFold, unas mezclas preformuladas de 92 transcripciones derivadas y trazables de plásmidos de ADN certificados con la certificación NIST. Las transcripciones están diseñadas para tener una longitud de 250 a 2000 nt, lo cual imita los ARNm eucarióticos naturales.

Desbloquear el potencial del análisis de ARN
El análisis de ARN, incluido el perfilado de la expresión génica y el estudio cdel transcriptoma completo, puede llevar a una mejor comprensión de los patrones de expresión en los estados de la enfermedad y proporciona un mayor conocimiento de las vías biológicas y los mecanismos moleculares que regulan el destino celular, el desarrollo y la progresión de la enfermedad. Los métodos tradicionales para el análisis de ARN, como la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) y los microarreglos, tienen una eficacia demostrada. En la actualidad, los sustituye la secuenciación de última generación, una alternativa digital de gran rendimiento. Debido a que cada método utiliza múltiples plataformas, y con la necesidad de comparar varias muestras a través de plataformas en todo el mundo, una medida estándar para la comparación de datos es necesaria. A medida que las capacidades del análisis de ARN se expandan, será aún más importante la necesidad de crear una visión estandarizada de los datos.

Lograr y comparar resultados con precisión confirmada
Las mezclas de sustancia añadida de ARN ERCC ExFold se utilizan para crear una medición de referencia estándar de ARN tanto dentro de un experimento como entre varios experimentos realizados utilizando varias muestras y plataformas. Gracias a las dos formulaciones de mezcla de sustancia añadida (véase la figura), se pueden examinar varias mediciones, como la sensibilidad y el rango dinámico, para evaluar los distintos parámetros en un experimento o varios (véase la figura). Además, las relaciones de cambio de expresión entre dos muestras se pueden calcular con un alto grado de confianza mediante la relación altamente concordante entre la sustancia añadida de ARN ExFold 1 y la sustancia añadida de ARN ExFold 2 (véase la figura). Las mediciones se determinaron a través de concentraciones molares conocidas para cada transcripción dentro de una mezcla de sustancia añadida y a través de asociación de las dos mezclas utilizando una combinación de relaciones a través de 4 subgrupos diferentes de las 92 transcripciones. Los controles son ideales para experimentos de secuenciación de última generación, como en el sistema SOLiD™, y plataformas de micromatrices como Illumina™ Sentrix™ BeadChip.

Elija entre varias opciones flexibles de configuración del kit ERCC
Ya sea para medir o bien el rango dinámico, o bien el cambio de plegado de expresión, las Mezclas de control de sustancias añadidas ERCC están disponibles en dos configuraciones de kit para responder a sus necesidades experimentales. Utilice la mezcla de control de sustancia añadida de ERCC para determinar el rango dinámico y el límite inferior de detección de la plataforma. Utilice las mezclas de sustancias añadidas de ERCC ExFold para evaluar la precisión de las mediciones de expresión génica diferencial.

	Mezcla de sustancia añadida de ARN ERCC 1*	Mezcla de sustancia añadida ExFold 1*	Mezcla de sustancia añadida ExFold 2*	Agua libre de nucleasas
Mezcla de sustancia añadida de ARN de ERCC (n.º cat. 4456740)	10 μl	—	—	1,75 ml
Mezclas de sustancias añadidas de ARN de ERCC ExFold (n.º cat. 4456739)	—	10 μl	10 μl	1,75 ml

* Aunque la mezcla de sustancia añadida de ARN ERCC 1 y la mezcla de sustancia añadida ExFold 1 contienen la misma formulación de transcripciones de ERCC, no sustituya la mezcla de sustancia añadida de ARN ERCC 1 por la mezcla de sustancia añadida ExFold 1 para la evaluación de cambio de plegado. Utilice solo las mezclas de sustancia añadida ExFold 1 y 2 con el mismo número de lote de fabricación.