Invitrogen™ Kit de purificación Dynabeads™ mRNA DIRECT™

El kit de ARNm DIRECT™ de Dynabeads® está diseñado para el aislamiento rápido y sencillo de ARN mensajero (ARNm) poliadenilado puro e intacto (poliA) directamente de lisado crudo de tejidos y células animales y vegetales. El ARNm aislado es adecuado para su uso en todas las aplicaciones posteriores. Ventajas del kit de ARNm DIRECT™ de Dynabeads®:

• Rápido: un procedimiento de 15 minutos que produce ARNm puro intacto
• Aislamiento de ARNm de alta pureza: la mejor opción previa a la síntesis de ADN complementaria (ADNc)
• Sensibilidad del aislamiento de ARNm: permite la síntesis de ADNc y la construcción de bibliotecas de ADNc a partir de muestras de partida ultrapequeñas (permite la construcción de bibliotecas de ADNc a partir de una única célula)

Descripción general del sistema
El protocolo de aislamiento se basa en pares de base entre los residuos de poliA en el extremo 3' de la mayoría del ARNm y los residuos de oligo (dT)₂₅ unidos covalentemente a la superficie del Dynabeads®. Otras especies de ARN que carecen de una cola poliA no se hibridan con los gránulos y se eliminan fácilmente. El ARN ribosómico, el ADN, las proteínas y las pequeñas moléculas de ARN (como ARN de transferencia, micro ARN y pequeños ARN nucleolares) no se unen a los gránulos y se descartan. Los agentes inhibidores de ARNasa en el tampón de lisis/unión junto con estrictas condiciones de lavado e hibridación garantizan el aislamiento de ARN puro intacto a partir de muestras crudas ricas en ARNasa, sin utilizar agentes caotrópicos fuertes. Los gránulos (beads) de purificación de ARNm se dirigen y capturan la transcriptoma de ARNm a partir de una amplísima variedad de muestras iniciales crudas (véase el protocolo). 1 mg de gránulos Dynabeads® oligo (dT)₂₅ (200 μl) enlaza hasta 2 μg de ARNm. Una célula de mamífero típica contiene alrededor de entre 10 y 30 pg de ARN total, de los cuales entre un 1 % y un 5 % es ARNm.