Invitrogen™ CyQUANT™ MTT and XTT Cell Viability Assays

Descripción

CyQUANT MTT and XTT Cell Viability assays are colorimetric microplate assays used to measure the metabolic activity of cells, which is an indicator of cell viability, proliferation, and cytotoxicity. CyQUANT MTT and XTT function as cell health indicators by using the cellular redox potential of live cells to convert a tetrazolium-based salt reagent, MTT or XTT, to a brightly colored formazan product. The absorbance of the formazan can be measured using a microplate reader and correlates with the number of metabolically active cells to quantitively measure cell viability and proliferation.

El kit consta de dos reactivos, el reactivo XTT y el reactivo de acoplamiento de electrones. El reactivo XTT se utiliza para evaluar la viabilidad celular en función del potencial de redox celular, y el reactivo de acoplamiento de electrones mejora el rango dinámico del ensayo.

El ensayo es suficiente para diez placas de 96 pocillos y consta de 10 frascos de reactivo XTT y 10 tubos de reactivo de acoplamiento de electrones. Un frasco de cada (suficiente para una placa de 96 pocillos) se descongela, se mezcla, se añade a las células y se incuba. La señal de viabilidad se detecta mediante un lector de microplacas basado en la absorbancia. En células de mamíferos viables que respiran activamente, el reactivo XTT soluble en agua se reduce y se convierte en un producto de formazán de color naranja.

Las características del ensayo de viabilidad celular CyQUANT™ XTT incluyen:
• Ensayo de viabilidad altamente reproducible basado en la absorbancia
• Mejora del rango dinámico y la sensibilidad en comparación con otros ensayos de viabilidad colorimétrica
• Formato simple de mezcla y lectura, configurado para una placa de 96 pocillos a la vez
• Ensayo no tóxico y continuo: se pueden recoger varios puntos de tiempo sin lisis celular

La medición de los cambios en la viabilidad celular es un método fundamental para evaluar la salud de las células, determinar la genotoxicidad y evaluar los fármacos contra el cáncer. Además de ser rentables, los ensayos de viabilidad colorimétrica generan resultados consistentes con una baja variabilidad entre pocillos. A diferencia de otros ensayos de viabilidad de células de mamíferos colorimétricas disponibles en el mercado, los ensayos basados en XTT muestran un alto rango dinámico y una baja variabilidad. Además de mejorar el rendimiento, el ensayo es continuo y no requiere solubilización ni lisis celular.

El ensayo de viabilidad celular CyQUANT™ XTT es un kit completo y optimizado para la detección de la viabilidad de las células de mamíferos. El kit de ensayo incluye el reactivo XTT (2,3-bis-(2-metoxi-4-nitro-5-sulfofenil)-2H-tetrazolio-5-carboxanilida) y el reactivo de acoplamiento de electrones. El reactivo XTT, que es un compuesto a base de tetrazolio, es sensible al potencial de redox celular y en presencia de células que respiran activamente se convierte de un compuesto soluble en agua a un producto de formazán de color naranja. La sensibilidad y la consistencia del ensayo aumentan significativamente cuando se utiliza con el reactivo de acoplamiento de electrones.

Dado que no se requiere solubilización ni lisis celular para la detección, el ensayo XTT puede utilizarse como un ensayo continuo y pueden analizarse varios puntos de tiempo. Además, el ensayo CyQUANT™ XTT genera resultados de viabilidad a partir de varios tipos de líneas celulares, incluidas las células primarias y en suspensión.

Para cada placa de 96 pocillos, se descongela un frasco de reactivo XTT y un tubo de reactivo de acoplamiento de electrones, se mezclan para crear una solución madre y se añaden a las células, con lo que se detecta la viabilidad de las células después de una incubación de 2–4 horas. El kit de ensayo suministra todos los materiales necesarios para diez placas de 96 pocillos.

Se recomienda utilizar la solución madre del reactivo XTT/de acoplamiento de electrones poco después de la mezcla. El rendimiento del ensayo se ve afectado y la sensibilidad se reduce si la solución madre se mantiene a temperatura ambiente durante largos periodos de tiempo o se somete a ciclos de congelación/descongelación. Para garantizar el rendimiento y la reproducibilidad del ensayo, el ensayo de viabilidad celular CyQUANT™ XTT consta de reactivos XTT y de acoplamiento de electrones independientes que se mezclan.