Invitrogen™ Click-iT™ TUNEL Alexa Fluor Imaging Assays for Microscopy & HCS

La apoptosis se caracteriza por procesos celulares definidos, incluidos el redondeo celular, la vesiculación y la fragmentación del ADN. El ensayo TUNEL es el método analítico más utilizado para detectar ADN fragmentado en células apoptóticas en muestras de tejido, comenzando con la incorporación de dUTP modificadas en los extremos 3’-OH del ADN fragmentado. Las dUTP a menudo incluyen una molécula de fluoróforo. Debido al tamaño del fluoróforo, las dUTP modificadas pueden mostrar unas tasas de incorporación inferiores a las esperadas, lo que puede afectar a la sensibilidad del ensayo TUNEL. Con bastante frecuencia, los fluoróforos utilizados en kits de ensayo TUNEL disponibles actualmente presentan decoloración fotográfica y problemas de solapación espectral fluorescente, que reducen la sensibilidad y la capacidad de multiplex de estos ensayos.

El ensayo Click-iT Plus TUNEL se ha desarrollado para abordar estos problemas y se basa en una reacción catalizada de cobre (I) (es decir, clic) entre una azida y un alquino. El pequeño tamaño de la azida Alexa Fluor, que tiene un peso molecular de aproximadamente 1 kDa, permite una incorporación más sencilla del colorante Alexa Fluor 488, 594 o 647 en muestras complejas, en comparación con anticuerpos mayores (peso molecular ˜ 100 000 Da). Esto permite una permeabilización o fijación suave y un tiempo de respuesta más rápido del ensayo (aproximadamente dos horas), así como la detección de un porcentaje más alto de células apoptóticas en condiciones idénticas. A causa de sus condiciones de reacción suaves, el ensayo Click-iT Plus TUNEL también permite el multiplexing con colorantes o proteínas fluorescentes.

Los ensayos de adquisición de imágenes Click-iT TUNEL Alexa Fluor contienen todos los componentes necesarios para detectar de forma precisa y fiable la apoptosis en células adherentes cultivadas en cubreobjetos o microplacas de 96 pocillos, y también incluyen ADNasa I para generar roturas de cadena para el control positivo.