Molecular Probes™ Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 488 Protein Synthesis Assay Kit

El kit de ensayo de síntesis de proteínas Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 488 proporciona un método rápido, sensible, no tóxico y no radiactivo para la detección de la síntesis de proteínas nacientes utilizando microscopía de fluorescencia, imágenes de alto contenido o citometría de flujo. El kit incluye L-homopropargilglicina (HPG), un aminoácido análogo de la metionina que contiene una moiedad de alquinos y azida de Alexa Fluor™ 488. Con la HPG se alimenta a células cultivadas y se incorpora a proteínas durante la síntesis de proteínas activas. La adición de la azida de Alexa Fluor™ 488 genera una ligadura quimioselectiva o reacción de «clic» entre la azida fluorescente verde y el alquino, lo que permite que las proteínas modificadas se detecten mediante un análisis basado en imágenes.

Alternativa no radioactiva: alternativa a la tradicional ³⁵ S-metionina

Visualizar los valores dinámicos de proteínas en bloque: el etiquetado fluorescente de proteínas permite determinar su localización, incluyendo la agregación

Especificidad: reacción específica y selectiva entre etiquetas de detección y clasificación

Estabilidad: el producto contiene un enlace covalente irreversible

Multiplex activado: se usa en conjunto con Click™-iT AHA (aminoácido azida y colorante alquino) para detectar diferencias espaciales y temporales

Aplicabilidad a muestras biológicas: detección sencilla; alta sensibilidad y bajo fondo, independientemente de la complejidad

El kit de ensayo de síntesis de proteínas Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 488 se ha probado con éxito en células HeLa, A549 y U-2 OS con una variedad de reactivos que inhiben la síntesis de proteínas, incluyendo cicloheximida y anisomicina. La aplicabilidad de estas sondas para controlar la degradación de las proteínas también se ha demostrado mediante inhibidores del proteasoma (MG132 y Bortezomib) y bloqueadores de la autofagia (cloroquina) en células HeLa.

Además, debido a las diferencias en la química de Click-iT™ entre el kit de ensayo de síntesis de proteínas Click-iT™ HPG Alexa Fluor™ 488 y Click™-iT AHA con Alexa Fluor™ 594 Alkyne, estos reactivos pueden usarse en conjunto para la determinación espacial o temporal de las diferencias en la síntesis de proteínas nacientes.