Thermo Scientific™ CellSensor™ AP-1-bla A375 Cell Line

La línea celular CellSensor® AP1-bla A375 contiene un gen indicador de betalactamasa bajo control del elemento de respuesta AP1 integrado de forma estable en las células A375. Las células A375 son células cancerosas de melanoma humano que contienen la mutación V600E de B-Raf endógena, lo que lleva a la activación constitutiva de la cinasa B-Raf. La línea celular CellSensor® AP1-bla A375 es una población clónica aislada por citometría de flujo basada en la expresión constitutiva de la betalactamasa. Esta línea celular se ha validado con varios inhibidores de Raf de moléculas pequeñas, así como con ARNip de Stealth RNAi™ para B-Raf. Esta línea celular también se ha probado para determinar el rendimiento del ensayo en condiciones variables, incluidos la concentración de DMSO, el número de células, el tiempo de incubación de compuestos y el tiempo de carga del sustrato, y se ha validado para las concentraciones del factor Zfi e IC50 del inhibidor I de Raf1. La familia de genes RAF (RAF1, A-RAF y B-RAF) codifica las quinasas de proteínas de serina/treonina estrechamente relacionadas que son efectoras importantes de la activación de Ras. Raf1 y A-Raf rara vez mutan, mientras que las mutaciones en B-Raf son frecuentes en los cánceres humanos, especialmente en el melanoma. El B-Raf muta en aproximadamente el 70 % de los melanomas humanos, en el 35-70 % de los carcinomas papilares tiroideos y, con menos frecuencia, en los carcinomas pulmonares y colorrectales. Las mutaciones se encuentran principalmente en el dominio de la cinasa B-Raf y, en los melanomas, la gran mayoría son mutaciones V600E de sentido alterado que conducen a la activación de la cinasa B-Raf. La activación constitutiva de B-Raf por V600E puede conducir directamente a la activación de la vía de señalización de Mek/MAPK. Por lo tanto, la inhibición de la señalización de B-Raf/Mek/MAPK podría ser una forma potencial de tratar los melanomas y otros tumores con mutación en B-Raf.