Invitrogen™ Kit de ensayo de citometría de flujo verde de senescencia CellEvent™

El kit contiene un tampón optimizado y un reactivo a base de fluoresceína que contiene dos porciones de galactosidas, lo que lo convierte en un objetivo específico para la βgalactosidasa. La activación de βgalactosidasa se usa comúnmente como biomarcador para las células senescentes. Esta enzima hidrolasa reside en lisosomas y convierte βgalactosidos en monosacáridos en condiciones de pH ácido. El producto descompuesto por enzimas se retiene dentro de la célula debido a la unión covalente de proteínas intracelulares y emite una señal fluorogénica que tiene una absorción / emisión máxima de 490/514 nm.

Las características del kit de ensayo de citometría de flujo verde de la senescencia CellEvent incluyen:
• Detección fluorescente de la hidrólisis de βgalactosidasa por citometría de flujo
• Ensayo celular fijo
• Compatibilidad multicolor

Cuando las células normales alcanzan el final de su vida útil replicativa limitada, conocida como el límite de Hayflick, entran en una fase senescente donde permanecen metabólicamente activas sin someterse a procesos de muerte celular. Estas células senescentes adoptan un estado fenotípico específico que incluye la aparición de células multinucleadas, el aumento de la vacuolización, la expresión de la βgalactosidasa dependiente del pH y cambios morfológicos en los que las células se agrandan y extienden. A través de varios mecanismos, pueden desempeñar un papel en la supresión del tumor, en la progresión del tumor, en el envejecimiento y la reparación de tejidos.

Laβgalactosidasa reside en lisosomas y convierte los βgalactosidos en monosacáridos en condiciones de pH ácido. La actividad es óptima bajo el pH lisosómico 4, pero los ensayos convencionales miden en pH 6. Se ha demostrado que la actividad normalizada de la βgalactosidasa es el doble en las células senescentes que en las células presenescentes, independientemente del valor de pH utilizado para las pruebas.

Tradicionalmente, el sustrato colorimétrico para la βgalactosidasa, 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galactopiranósido (x-gal), se ha utilizado durante mucho tiempo para detectar la actividad metabólica en células in vitro. Tras la hidrólisis por βgalactosidasa, x-gal se convierte en un precipitado azul, que no es adecuado para ensayos citométricos de flujo. Por lo tanto, hemos desarrollado un sustrato fluorescente sensible a la βgalactosidasa que puede usarse en ensayos de citometría de flujo para la detección de células senescentes.