Invitrogen™ Catalase Colorimetric Activity Kit

El kit de la actividad de la catalasa (para uso exclusivo en investigación) es un ensayo colorimétrico de actividad diseñado para la detección y cuantificación de la actividad de la catalasa en muestras de suero, plasma, células, tejidos y lisados eritrocitos.

Este kit completo y listo para usar incluye placas transparentes de 96 pocillos, estándar de catalasa (100 unidades/ml), sustrato de catalasa y otros componentes para realizar el ensayo. Un lector de microplacas de 96 pocillos capaz de leer la densidad óptica a 560 nm (intervalo aceptable: de 540 a 580 nm).

Características de rendimiento
• Tipo de ensayo: kit de actividad colorimétrica
• Tipos de muestras: suero, plasma, células, tejidos y lisados de eritrocitos.
• Sensibilidad: 0,052 U/ml
• Intervalo de curva estándar: 0,15–5,0 U/ml
• Reactividad: independiente de la especie

Antecedentes
El peróxido de hidrógeno es una de las especies reactivas de oxígeno más frecuentes. Se forma en el medio ambiente o como subproducto del metabolismo aeróbico, de la formación de superóxido y la desmutación, o como producto de la actividad de la oxidasa. Tanto el exceso de peróxido de hidrógeno como del producto resultante tras su descomposición, el radical hidroxilo, formado en una reacción de tipo Fenton, son perjudiciales para la mayoría de los componentes celulares. Su rápida eliminación es esencial para todas las células procariotas y eucariotas de metabolismo aerobio. Sin embargo, el peróxido de hidrógeno puede actuar como un segundo mensajero en las vías de transducción de señales, en la activación de las células inmunitarias, en los procesos de inflamación, en la proliferación celular y en la apoptosis.

Una de las formas más eficaces de eliminar el peróxido es a través de la enzima catalasa, que está codificada por un solo gen y se conserva a niveles altos entre las especies. Los mamíferos, incluidos los humanos y los ratones, expresan la catalasa en todos los tejidos, y en el hígado, los riñones y los eritrocitos se detectan altas concentraciones de catalasa. La expresión está regulada en los niveles de transcripción, postranscripción y postraslación. Se detecta una alta actividad de la catalasa en los peroxisomas. Más recientemente, se ha demostrado que la radiación UV de longitud de onda corta produce especies reactivas del oxígeno (ROS) mediante la actividad de la catalasa. Se cree que esta respuesta es un mecanismo para proteger el ADN, ya que convierte la radiación UV dañina en especies de ROS que pueden metabolizarse y desintoxicarse mediante enzimas antioxidantes celulares. Este ensayo se ha validado para su uso en plasmas con heparina, EDTA y suero de distintas especies.

Principio del ensayo
El kit de actividad de la catalasa está diseñado para medir cuantitativamente la actividad de la catalasa en una variedad de muestras. Se proporciona un estándar de catalasa bovina para generar una curva estándar para el ensayo; todas las muestras deben leerse en la curva estándar. Las muestras se diluyen en el tampón de ensayo suministrado y se añaden a los pocillos de una placa transparente de media área. Se añade peróxido de hidrógeno a cada pocillo y la placa se incuba a temperatura ambiente durante 30 minutos. Se añade el reactivo de detección colorimétrica suministrado, seguido de la peroxidasa de rábano diluida, y se incuba a temperatura ambiente durante 15 minutos. El HRP reacciona con el sustrato en presencia de peróxido de hidrógeno y convierte el sustrato incoloro en un producto de color rosa. El producto coloreado se lee a 560 nm. El aumento de los niveles de catalasa en las muestras provoca una disminución de la concentración de peróxido de hidrógeno y una reducción del producto rosa.

Definición de unidad de catalasa
Una unidad de catalasa descompone un micromol de peróxido de hidrógeno por minuto a 25 °C y pH 7,0.