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Invitrogen™ Bac-to-Bac™ HBM TOPO™ Secreted Expression System
Descripción
La expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ es un método eficaz para producir baculovirus para la expresión de proteínas de alto nivel en células de insectos. Se basa en la generación de virus recombinante por la transposición específica de sitio en E. coli (DH10Bac™) en lugar de una recombinación homóloga en células de insectos. El nuevo vector pFastBac™ HBM TOPO™ permite la expresión secretada de proteínas porque tiene la señal de secreción de melitina de abeja (HBM). Se debería considerar el nuevo vector para la expresión de las glicoproteínas. Las glicoproteínas no pueden ser glicosiladas en ausencia de cualquier señal de secreción. En contraste con las glicoproteínas secretadas de células de mamíferos, las glicoproteínas secretadas de baculovirus se pueden desglicosilar fácilmente in vitro. Esta es una característica muy importante para cristalizar las proteínas.
El vector pFastBac™ HBM TOPO™ también tiene una etiqueta His con extremo C-terminal con una señal de escisión de TEV que permite una fácil purificación de las proteínas de fusión de histidina en resinas quelantes de níquel (sistema de purificación ProBond™) y proteínas nativas con la ayuda de la proteasa AcTev™.
El vector utiliza un fuerte promotor de poliedrina para generar altos niveles de expresión en una variedad de líneas celulares de insectos como Sf9, Mimic™ Sf9, Sf21, y células High Five™ en medios SF-900 II y SF-900™ III de Gibco.
Los sistemas tradicionales de baculovirus requieren la purificación y amplificación de un sobrenadante viral inicial de bajo título. Esto necesita un análisis de placa, que requiere mucho tiempo. Sin embargo, los vectores Bac-to-Bac™ pFastBac™ se recombinan con el bacmid en células competentes de E. coli DH10Bac™ para formar un bacmid de expresión. Transfecta el bacmid en células de insectos para la producción rápida de un alto título de partículas de baculovirus recombinantes puros en la primera transfección. Ahorrará preciadas semanas. Obtenga un stock de baculovirus P2 puro el día 10 sin necesidad de llevar a cabo un tedioso ensayo de placas.
El vector pFastBac™ HBM TOPO™ también tiene una etiqueta His con extremo C-terminal con una señal de escisión de TEV que permite una fácil purificación de las proteínas de fusión de histidina en resinas quelantes de níquel (sistema de purificación ProBond™) y proteínas nativas con la ayuda de la proteasa AcTev™.
El vector utiliza un fuerte promotor de poliedrina para generar altos niveles de expresión en una variedad de líneas celulares de insectos como Sf9, Mimic™ Sf9, Sf21, y células High Five™ en medios SF-900 II y SF-900™ III de Gibco.
Los sistemas tradicionales de baculovirus requieren la purificación y amplificación de un sobrenadante viral inicial de bajo título. Esto necesita un análisis de placa, que requiere mucho tiempo. Sin embargo, los vectores Bac-to-Bac™ pFastBac™ se recombinan con el bacmid en células competentes de E. coli DH10Bac™ para formar un bacmid de expresión. Transfecta el bacmid en células de insectos para la producción rápida de un alto título de partículas de baculovirus recombinantes puros en la primera transfección. Ahorrará preciadas semanas. Obtenga un stock de baculovirus P2 puro el día 10 sin necesidad de llevar a cabo un tedioso ensayo de placas.
Especificaciones
Especificaciones
| Tipo | Sistema de expresión secretada |
| Método de clonación | Blunt TOPO™ |
| Etiqueta de proteína | Etiqueta His (6x) |
| Cantidad | 20 reacciones |
| Contenido y almacenamiento | Sistema de expresión secretada Bac-to-Bac HBM TOPO: • Kit de vectores para 20 reacciones de clonación TOPO, almacenar a - 20 °C –pVector FastBac/HBM-TOPO que contiene el sitio de escisión TEV del terminal C y la etiqueta His –Plásmido de control pFastBac 1-Gus (vector de expresión de control) –Otros reactivos del kit: 10X PCR, mezcla de dNTP, solución salina, agua estéril, plantilla de control PCR, primer directo de poliedrina, primer inverso SV40 pA • E. coli químicamente competente One Shot Mach1-T1R para 20 reacciones (20 x 50 μl), almacenar a - 80 °C • E. coli competente MAX Efficiency DH10 para 20 reacciones (4 kits con 5 x 0,1 ml cada uno), almacenar a - 80 °C • Reactivo de transfección ExpiFectamine SF (1 ml), almacenar a 4 °C, no congelar |
| Agente de selección (eucariótico) | Ninguno |
| Mecanismo de expresión | Expresión basada en células |
| Sistema de expresión | Baculovirus |
| Línea de productos | BAC-to-Bac, TOPO |
| Promotor | Poliedrina |
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Título del producto
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