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Invitrogen™ Bac-to-Bac™ HBM TOPO™ Cloning Kit
Descripción
La expresión de baculovirus Bac-to-Bac™ es un método eficaz para producir baculovirus para la expresión de proteínas de alto nivel en células de insectos. Se basa en la generación de virus recombinante por la transposición específica de sitio en E. coli (DH10Bac™) en lugar de una recombinación homóloga en células de insectos. El nuevo vector pFastBac™ HBM TOPO™ permite la expresión secretada de proteínas porque tiene la señal de secreción de abeja melitina (HBM). Se debería considerar el nuevo vector para la expresión de las glicoproteínas. Las glicoproteínas no pueden ser glicosiladas en ausencia de cualquier señal de secreción. En contraste con las glicoproteínas secretadas de células de mamíferos, las glicoproteínas secretadas de baculovirus se pueden desglicosilar fácilmente in vitro. Esta es una característica muy importante para cristalizar las proteínas!
El vector pFastBac™ HBM TOPO™ también tiene una etiqueta His con terminación de tipo C con una señal de segmentación TEV que permite una fácil purificación de las proteínas de fusión de histidina en resinas quelantes de níquel (sistema de purificación ProBond™) y proteínas nativas con la ayuda de la proteasa AcTev™.
El vector utiliza el fuerte promotor de poliedrina para generar altos niveles de expresión en una variedad de líneas celulares de insectos como Sf9, Mimic™ Sf9, Sf21, y células High Five™ en medios SF-900 II & SF-900™ III de Gibco.
Los sistemas tradicionales de baculovirus requieren la purificación y amplificación de un sobrenadante viral inicial de bajo título. Esto necesita un análisis de placa, que requiere mucho tiempo. Sin embargo, los vectores Bac-to-Bac™ pFastBac™ se recombinan con el bácmido en células competentes de E. coli DH10Bac™ para formar un bacilo de expresión. Transfecta el bacmid en células de insectos para la producción rápida de un alto título de partículas de baculovirus recombinantes puros en la primera transfección. Ahorrará preciadas semanas. Recoja un suministro de baculovirus P2 puro el día 10 sin necesidad de un tedioso ensayo de placas.
El vector pFastBac™ HBM TOPO™ también tiene una etiqueta His con terminación de tipo C con una señal de segmentación TEV que permite una fácil purificación de las proteínas de fusión de histidina en resinas quelantes de níquel (sistema de purificación ProBond™) y proteínas nativas con la ayuda de la proteasa AcTev™.
El vector utiliza el fuerte promotor de poliedrina para generar altos niveles de expresión en una variedad de líneas celulares de insectos como Sf9, Mimic™ Sf9, Sf21, y células High Five™ en medios SF-900 II & SF-900™ III de Gibco.
Los sistemas tradicionales de baculovirus requieren la purificación y amplificación de un sobrenadante viral inicial de bajo título. Esto necesita un análisis de placa, que requiere mucho tiempo. Sin embargo, los vectores Bac-to-Bac™ pFastBac™ se recombinan con el bácmido en células competentes de E. coli DH10Bac™ para formar un bacilo de expresión. Transfecta el bacmid en células de insectos para la producción rápida de un alto título de partículas de baculovirus recombinantes puros en la primera transfección. Ahorrará preciadas semanas. Recoja un suministro de baculovirus P2 puro el día 10 sin necesidad de un tedioso ensayo de placas.
Especificaciones
Especificaciones
| Línea de células | High Five™, Sf21, Sf9 |
| Tipo de célula | Célula de insecto |
| Método de clonación | Blunt TOPO |
| Hendidura | Lugar de reconocimiento de proteasas TEV |
| Contenido y almacenamiento | Kit de clonación Bac-to-Bac™ HBM TOPO™ contiene: (Para obtener más información, consulte el manual) • Kit de vectores para 20 reacciones de clonación TOPO • Vector pFastBac⁄HBM TOPO™ que contiene el sitio de segmentación TEV de la terminación de tipo C y la etiqueta His. • Plásmido de control PFastBac⁄CT-Gus (vector de expresión de control) • Otros reactivos suministrados: 10x PCR, mezcla de dNTP, solución salina, agua estéril, plantilla de PCR de control, cebador de avance de polihedrina, • kit de cebador inverso SV40 pA que contiene células competentes (20 reacciones): • E. coli One Shot™ Mach1-T1R químicamente competente Kit de vectores: almacenar a -20 °C E. coli One Shot™ Mach1-T1R químicamente competente: almacenar a -80 °C |
| Formato | Kit |
| Mecanismo de expresión | Expresión basada en células |
| Sistema de expresión | Baculovirus |
| Para utilizar con (aplicación) | Expresión de proteínas |
| Compatibilidad de alto rendimiento | Compatible con alto rendimiento, no compatible con alto rendimiento (manual) |
| Mostrar más |
Para uso exclusivo en investigación. No apto para uso en procedimientos diagnósticos.
Título del producto
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