Thermo Scientific™ aminoxyTMTsixplex™ Label Reagent Set

Los reactivos de marcado aminoxyTMTsixplex comparten una estructura idéntica, pero contienen diferentes números y combinaciones de isótopos 13C y 15N en el indicador de masas. El procedimiento de marcado optimizado se puede realizar en una hora. Después del etiquetado, las muestras se enfrían y limpian mediante la extracción en fase sólida por HILIC antes del análisis por espectrometría de masas. Los seis compuestos del conjunto de reactivos aminoxyTMTsixplex™ tienen la misma masa (es decir, isobárica) y estructura química (grupo aminoxi carbonilorreactivo, brazo separador e indicador de masas). Sin embargo, la distribución específica de isótopos 13C y 15N a cada lado del sitio de fragmentación de MS/MS de HCD o ETD en cada reactivo da como resultado una masa indicadora única (126-131Da) en la región de masa baja. Este conjunto de iones indicadores se utiliza para medir la abundancia relativa de moléculas marcadas en una muestra de MS combinada (multiplexada) que representa seis condiciones de tratamiento diferentes. Para las aplicaciones MS de glicobiología, los reactivos permiten el perfilado cuantitativo de las isoformas de glicano y el descubrimiento de biomarcadores de glicano; proporcionan una ionización mejorada de los glicanos marcados para una mayor sensibilidad y una mejor retención de los glicanos marcados mediante cromatografía líquida de fase inversa (RPLC). Los reactivos aminoxyTMT se pueden utilizar para cuantificar una amplia gama de moléculas biológicamente importantes, incluidos carbohidratos, esteroides o proteínas oxidadas.

Características:
• Cuantitativo: permite la cuantificación relativa de glicanos u otras biomoléculas que contienen carbonilo a partir de múltiples muestras derivadas de células, tejidos o fluidos biológicos
• Estable: el enlace de oxima y los productos formados por la reacción de marcado son estables y no requieren un paso de reducción adicional
• Eficaz: logre una eficacia de marcado superior al 90 % en una hora
• Sensible: aumento en 20 veces de la relación señal-ruido en comparación con el análisis de MS de glicanos nativos sin marcar
• Multiplexado: capaz de identificar y caracterizar hasta seis muestras simultáneamente
• Optimizado: procedimientos y reactivos optimizados para una excelente eficacia de marcado y recuperación de glicanos

Incluye:
• Los juegos de reactivos de marcado contienen suficientes etiquetas aminoxyTMT para cinco experimentos de seis complejos

Requiere:
• Columnas HLB de PNGasa F (o PNGasa A) glicosidasa y Waters Oasis™

Aplicaciones:
• Multiplexe hasta 6 muestras diferentes simultáneamente en un solo experimento
• Cuantificación relativa de glicanos
• Estudio de la diversidad estructural de la glicosilación de proteínas
• Estudio de la glicosilación en la señalización y regulación celulares
• Estudio de la progresión del cáncer, el descubrimiento de biomarcadores y el análisis de bioterapias

Los glicanos nativos son difíciles de estudiar mediante espectrometría de masas debido a su baja eficiencia de ionización. La cuantificación de los glicanos es particularmente difícil debido a la falta de estándares para todos los glicanos naturales y a las dificultades para cuantificar de forma reproducible múltiples muestras. El grupo aminoxi tiene mejor reactividad con los carbonilos y mejor estabilidad del producto marcado en comparación con las hidrozidas. El marcado con los reactivos aminoxyTMT mejora la ionización de los glicanos, lo que mejora la sensibilidad y permite la cuantificación relativa de los glicanos para hasta seis muestras simultáneamente.

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