Invitrogen™ RecoverAll™ Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE

Descripción

El kit de aislamiento de ácidos nucleicos totales RecoverAll™ para FFPE se destina a la extracción de ácidos nucleicos totales de tejidos fijados en formol incluido en parafina (FFPE) o en paraformol incluido en parafina. Se incluyen reactivos suficientes para 40 purificaciones de hasta 4 secciones de 20 µm o de hasta 35 mg de muestras básicas sin secciones. Características del kit de aislamiento de ácidos nucleicos totales RecoverAll™ para FFPE:

• Optimizado para el aislamiento de ácidos nucleicos totales, incluido el microARN, a partir de tejido FFPE
• No es necesaria la digestión de la proteinasa K durante la noche: desparafine por la mañana y realice la qRT-PCR por la tarde.
• El rendimiento típico es > 50 % en comparación con los tejidos no fijados.
• Los ácidos nucleicos recuperados son adecuados para la secuenciación de última generación, la RT-PCR en tiempo real, la PCR, la detección de mutaciones y los análisis con micromatrices

Extracción de ácidos nucleicos de muestras difíciles
Las muestras de tejido archivadas contienen información valiosa sobre los grados de enfermedad, pero tradicionalmente era difícil aislar los ácidos nucleicos de estas muestras con una calidad adecuada para el análisis molecular. Las técnicas de conservación estándar utilizan formol, que mantiene la estructura del tejido y evita la putrefacción, pero que también atrapa los ácidos nucleicos y los modifica a través de los entrecruzamientos proteína-proteína y proteína-ácido nucleico. Con frecuencia, el ARN (y hasta cierto punto el ADN) está tan fragmentado y modificado a nivel químico que es incompatible con muchas técnicas de análisis molecular. La fragmentación del ARN en tejidos FFPE no puede invertirse, pero las condiciones para la digestión de proteasas del kit RecoverAll™ se han diseñado para liberar una cantidad máxima (consulte la figura) de fragmentos de ARN atrapado de todos los tamaños, incluido el microARN, en una cantidad de tiempo relativamente corta.

Solución del kit de aislamiento de ácidos nucleicos totales RecoverAll™
El procedimiento del kit de aislamiento de ácidos nucleicos totales RecoverAll™ requiere unos 45 minutos de manipulación y habitualmente puede completarse en menos de 1 día en el caso del ARN. Las muestras FFPE se desparafinan con una serie de lavados de etanol y xileno. A continuación, se las somete a una extensa digestión de proteasas con un tiempo de incubación adaptado a la recuperación del ARN o el ADN. Después, los ácidos nucleicos se purifican con un método rápido de filtrado con vidrio y se eluyen en agua o en un tampón bajo en sal.

Ácidos nucleicos para prácticamente cualquier aplicación posterior
Como ocurre con todos los tejidos FFPE, la fijación y el almacenamiento de la muestra suele provocar la modificación y fragmentación de los ácidos nucleicos. Por lo tanto, es posible que para obtener unos resultados óptimos sea necesario modificar las aplicaciones posteriores, como los análisis de micromatrices, que requieren un ARN más cristalino que la qRT-PCR. Aunque el ADN no suele fragmentarse tan fácilmente como el ARN, parece que reacciona más al formol y que requiere un tiempo de digestión de proteasas superior (2 días) para liberar cantidades importantes de ADN.

No compatible con alto rendimiento (manual)

Purificación y análisis de ADN y ARN, extracción de ARN, purificación de ácidos nucleicos especiales (p. ej., ácidos nucleicos totales), aislamiento de ARN total, ARN total de muestras de FFPE