Invitrogen™ Dynabeads™ Oligo(dT)₂₅

Los gránulos de aislamiento de ARNm con Oligo(dT)₂₅ Dynabeads™ se dirigen y capturan específicamente moléculas de ARNm de prácticamente cualquier muestra sin procesar y eliminan la necesidad de purificar el ARN total cuando el ácido nucleico que contiene la información deseada es el ARNm. Puesto que el ARNm constituye solamente entre el 1 y el 5 % del ARN celular, el aislamiento de ARN total no es el método más eficaz para aislar el ARNm. Otras tecnologías diseñadas para purificar el ARN total producen ∼80 % de ARN ribosómico y obligan al ARNm a competir con el ARN ribosómico, el ARN de transferencia, el micro ARN, el pequeño ARN nucleolar y el pequeño ARN citoplásmico para unir las membranas. Ventajas de los gránulos con Oligo(dT)₂₅ Dynabeads™:

• Procedimiento rápido y suave que produce ARNm puro intacto
• Aislamiento de ARNm extremadamente puro: la mejor opción previa a la síntesis de ADNc
• La gran sensibilidad del aislamiento de ARNm permite la síntesis de ADNc y la construcción de bibliotecas de ADNc a partir de muestras de partida ultrapequeñas (permite la construcción de bibliotecas de ADNc a partir de una única célula)

Cómo funcionan los gránulos
Los gránulos recubiertos con oligo(dT)₂₅Dynabeads™ se dirigen y capturan específicamente el transcriptoma de ARNm de una amplísima variedad de muestras de partida sin procesar. El ARN ribosómico, el ADN, las proteínas y las pequeñas moléculas de ARN (como ARN de transferencia, micro ARN y pequeños ARN nucleolares) no se unen a los gránulos y se descartan. Los gránulos solo capturan ARN poliadenilado (ARNm). El ARNm aislado es puro, lo que elimina la necesidad de sustraer el ARN ribosómico o de tratar la ADNasa tras la extracción. Este sistema sin columna garantiza la máxima recuperación del transcriptoma:

• Captura física de ARNm en gránulos magnéticos móviles
• Procedimientos de manipulación magnética rápidos y suaves
• No se pierde ARNm durante las rotaciones con elevada fuerza g
• El ARNm no queda atrapado en las membranas de la columna durante la elución

Aplicaciones
El ARNm es adecuado para todas las aplicaciones moleculares posteriores, incluidas, entre otras, la clonación de genes, la síntesis de ADNc, la construcción de bibliotecas de ADNc, el RT-PCR, el RT-PCR cuantitativo, el RPA (ensayo de protección de la ribonucleasa), la hibridación sustractiva, la extensión de cebadores, SAGE y RACE. Los gránulos de aislamiento de ARNm con Oligo(dT)₂₅ Dynabeads™ son el método perfecto para la purificación de ARNm previa a la construcción de bibliotecas de ADNc. El uso de estos gránulos garantiza la máxima recuperación y enriquecimiento del transcriptoma. Estos gránulos capturan más transcriptoma que los métodos que integran un paso de aislamiento de ARN total previo al aislamiento de ARNm.

Versátiles opciones de elución
La elución puede realizarse en cualquier nivel de volumen, de hasta 5 μl como mínimo. La elución del ARNm es opcional, ya que las reacciones enzimáticas en los procedimientos posteriores no se ven inhibidas por la presencia de Dynabeads™. Asimismo, se puede realizar la síntesis de ADNc directamente en los gránulos para crear una biblioteca de ADNc en fase sólida reutilizable.