Invitrogen™ Acetylcholinesterase Fluorescent Activity Kit

Descripción

El kit de la actividad fluorescente de la acetilcolinesterasa (para uso exclusivo en investigación) es un ensayo que permite determinar la actividad fluorescente y está diseñado para la detección y cuantificación de la actividad de la acetilcolinesterasa en muestras de suero, plasma y membrana de eritrocitos.

Este kit completo listo para usar incluye placas negras de 96 pocillos, estándar de acetilcolinesterasa (1000 mU/ml), sustrato de acetilcolinesterasa, yoduro de acetiltiocolina y otros componentes para llevar a cabo el ensayo. Para utilizar este kit se necesita un lector de microplacas de fluorescencia de 96 pocillos capaz de leer emisiones fluorescentes a 510 nm, con excitación a 390 nm.

Características de rendimiento
• Tipo de ensayo: kit de actividad fluorescente
• Tipos de muestras: muestras de suero, plasma y membrana de eritrocitos
• Sensibilidad: 0,218 mU/ml
• Intervalo de curva estándar: 6,25–100 mU/ml
• Reactividad: independiente de la especie

Antecedentes
La acetilcolina (ACH) es un neurotransmisor esencial del sistema nervioso central y periférico. En el cerebro existen distintas áreas donde se concentran las neuronas colinérgicas. Los receptores de ACh nicotínicos y muscarínicos se reconocen como proteínas de fijación y efectoras para mediar la neurotransmisión química en neuronas, ganglios, corazón y fibras y glándulas musculares lisas.

La acetilcolinesterasa está codificada por el gen del AChE único; la diversidad estructural de los productos genéticos surge de la unión térmica del ARNm alternativo y las asociaciones postraslacionales de las subunidades catalíticas y estructurales. La principal forma de acetilcolinesterasa que se encuentra en el cerebro, los músculos y otros tejidos es la especie hidrofílica, que forma oligómeros vinculados a disulfuro con subunidades estructurales colagenosas que contienen lípidos. La otra forma de empalme alternativo, expresada principalmente en los tejidos eritroides, es estructuralmente distinta en el extremo C-terminal y contiene un péptido escindible con un anclaje GPI. Se asocia con los receptores de la membrana a través de las fracciones de fosfoinositida añadidas postranslacionalmente. Este ensayo se ha validado para su uso en suero, plasma con heparina y EDTA, y eritrocitos solubilizados de distintas especies.

Principio del ensayo
El kit de detección de la actividad de la acetilcolinesterasa está diseñado para medir cuantitativamente la actividad de la acetilcolinesterasa en una variedad de muestras. Se proporciona un estándar de AChE humano para generar una curva estándar para el ensayo; todas las muestras deben leerse en la curva estándar. El kit utiliza una molécula no fluorescente patentada, que se fija mediante un enlace covalente al producto de tiol de la reacción entre el sustrato de AChE y el AChE de los estándares o muestras, lo que genera un producto fluorescente que se puede leer a 510 nm en un lector de placas fluorescentes con excitación a 390 nm. El kit es adecuado para medir la actividad AChE en suero, plasma y eritrocitos adecuadamente diluidos de distintas especies. También medirá el AChE en muestras de tejido extraídas y lisados celulares.

Definición de unidad de AChE
Una unidad hidroliza de 1,0 μmol de yoduro de acetiltiocolina por minuto a pH 7,4 y a 37 °C.