¿Filtrar o no filtrar?
Pueden evitarse problemas graves en el análisis por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) si se presta atención a las señales de advertencia tempranas y se realiza un mantenimiento rutinario. La mayoría de las tareas de reemplazo de piezas en HPLC, como el cambio de sellos de la bomba, se reconocen fácilmente como mantenimiento necesario; sin embargo, la filtración de la fase móvil y de las muestras también son prácticas de mantenimiento altamente importantes.
La filtración de muestras y fases móviles es una práctica sencilla y económica que prolonga la vida útil de los consumibles del sistema HPLC, reduce el desgaste del sistema y preserva la integridad del equipo. Al revisar las consecuencias de prácticas inadecuadas de filtración, los analistas pueden familiarizarse con los signos de advertencia tempranos asociados a problemas de filtración y evitar gastos y tiempos de inactividad relacionados con reparaciones prolongadas y costos de reemplazo.
Qué tipo de filtro elegir
Inyectar muestras limpias prolonga la vida útil del inyector y de la columna. Las muestras se limpian de partículas y bacterias mediante filtros de jeringa desechables. Estos filtros desechables varían en tamaño (4–25 mm) y tamaño de poro (0.2–1.0 μm). Los filtros de jeringa son membranas encerradas en carcasas de plástico que se acoplan a una jeringa mediante un conector luer. La filtración se realiza aspirando el líquido en la jeringa, colocando el filtro y dispensando la muestra filtrada en un vial. Para reducir la variabilidad física y química entre fabricantes, se recomienda adquirir los filtros de muestra y fase móvil del mismo proveedor.
Para aplicaciones de HPLC, normalmente se selecciona un filtro de poros de 0.45 μm, mientras que para eliminación de bacterias o para UHPLC se elige un filtro de 0.2 μm. Para muestras con alta carga de partículas, Pall incorpora prefiltros de poros grandes en un mismo dispositivo junto con membranas de poros más pequeños. También existen filtros de baja unión a proteínas y filtros estériles. Los inyectores de HPLC están disponibles en varios estilos, incluidos inyectores con septum, dispositivos septumless stop-flow, y sistemas de válvulas manuales o automatizados. El inyector más común es el de válvula, el cual debe garantizar una introducción reproducible de la muestra.
La filtración de muestras y solventes evita que las conexiones de bajo volumen del inyector se bloqueen, rayen o presenten fugas. El bloqueo del lazo o de la línea de desecho provoca aumento de la presión de retorno y dificultad para llenar el lazo. Las conexiones de bajo volumen muerto, ubicadas entre la válvula del inyector y la columna para reducir el ensanchamiento de bandas, también pueden obstruirse. Otros factores que contribuyen a problemas en HPLC incluyen componentes del inyector dañados o incompatibles, volúmenes variables de muestra, fugas y aumento de la presión del sistema. Con una filtración adecuada, un inyector limpio y correctamente ajustado debería durar unas 5.000 inyecciones.
Elegir el filtro adecuado requiere conocer la compatibilidad filtro/disolvente y las características químicas y físicas del filtro. Estas características incluyen tamaño y distribución del poro, grosor del filtro, extraíbles, carácter hidrofóbico/hidrofílico, propiedades de unión, pirógenos, caudal de líquidos y gases, resistencia a la rotura, capacidad de autoclave, tamaño nominal del poro y capacidad de retención de partículas. Elegir un filtro incorrecto puede provocar que materiales extraíbles comprometan los resultados analíticos. En análisis cromatográfico, los materiales extraíbles pueden conducir a fenómenos como absorción de la muestra, coelución y picos extraños.
Cómo elegir el filtro adecuado
¿La aplicación de filtración es automática o manual?
¿Cuál es la compatibilidad química del filtro?
¿Qué área efectiva de filtración (EFA) se necesita para tu proceso?
¿Qué tamaño de poro debe utilizarse para lograr una filtración eficaz?
Resumen
La filtración de muestras y fases móviles es una práctica sencilla y económica que puede prolongar la vida útil de los consumibles de un sistema HPLC. Con una comprensión básica de cómo una filtración adecuada beneficia a los distintos componentes del sistema y seleccionando el filtro apropiado, los laboratorios pueden evitar el tiempo y el costo asociados con reparaciones inesperadas y reemplazo de piezas.
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