Cómo evitar que las puntas con filtro alteren la PCR
La investigación ha demostrado que la calidad de las puntas con filtro es fundamental para apoyar el procesamiento de muestras sin contaminación. Sorprendentemente, las puntas con filtro también pueden ser la fuente de contaminación en un experimento.
Una serie de estudios recientes ha demostrado que los elementos específicos que se encuentran en algunas marcas de puntas con filtro pueden explicar fallos inesperados en los ensayos. Además, se descubrió que las puntas con filtro fabricadas por Labcon™ tenían el nivel más bajo de varios elementos que se sabe que tienen un efecto en técnicas experimentales comunes.
Se utilizó la espectrometría de masas con plasma de acoplamiento inductivo (ICP-MS) para realizar un análisis elemental de 68 interferencias habituales con el fin de determinar el riesgo que suponen para ensayos clínicos y de investigación específicos. Esta rigurosa prueba, la primera de este tipo, se realizó en diferentes filtros de polímero que se encuentran en marcas de puntas con filtro disponibles en el mercado con el fin de cuantificar posibles elementos, aditivos, contaminantes, lixiviables y extraíbles. Las interferencias experimentales pueden proceder de la presencia de determinados elementos inorgánicos, metales pesados o aditivos de sellado. Las pruebas también incorporaron un análisis del rendimiento del material filtrante para calificar la capacidad de rendimiento en entornos específicos.
Algunos de los resultados de ICP-MS y análisis de los ensayos se centraron en los efectos negativos sobre la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Las puntas con filtro pueden venir con la afirmación de estar libres de inhibidores de la PCR, pero pueden contener impurezas que las hacen menos adecuadas para ciertos ensayos sensibles. Elementos como el calcio, el silicio y el zinc plantean riesgos claros y pueden alterar los resultados experimentales.
"Los estudios demuestran que el proceso de amplificación por PCR se ve afectado por elementos específicos que afectan a la polimerización del ADN, al recocido de los cebadores o a la desviación de la señal de fluorescencia utilizada para la detección y cuantificación en la qPCR."
Específicamente, el calcio puede actuar como un inhibidor de la Taq polimerasa en la PCR, con efectos sobre la amplificación del ADN causados por la unión competitiva que resulta en una amplificación menos eficiente. Los resultados de ICP-MS indican que las puntas con filtro fabricadas por la competencia pueden tener hasta 20 veces más calcio en comparación con las puntas con filtro Labcon™. El elemento zinc también puede actuar como inhibidor de la Taq polimerasa en la PCR, con efectos que se cree que causan un empeoramiento del rendimiento de la enzima. Un análisis similar sobre la presencia de zinc en los filtros resultó en un nivel 38 veces superior de zinc en las puntas de la competencia en comparación con las puntas con filtro Labcon™. El silicio también se ha identificado como un ion perturbador en la PCR, con un mecanismo potencialmente relacionado con la adhesión de la Taq polimerasa al silicio durante la amplificación. Se descubrió que el nivel de silicio era 10 veces superior en las puntas con filtro de la competencia que en las puntas con filtro Labcon™.
El aumento de la confianza en las puntas con filtro ha dado lugar a nuevos e innovadores estándares de calidad y a la mejora de los resultados experimentales en entornos de investigación, preclínicos y clínicos. El uso de puntas con filtro en laboratorios CLIA (Clinical Laboratory Improvement Amendments) que realizan diagnósticos, genotipado y cultivo de tejidos aumenta la necesidad de consumibles fiables para proporcionar diagnósticos clínicos precisos y evitar resultados comprometidos. Las puntas con filtro Labcon™ de alta calidad, fabricadas en California, han demostrado ser superiores en múltiples medidas de elementos potencialmente inhibidores. La capacidad de las puntas con filtro Labcon™ para ofrecer un rendimiento sin contaminación garantiza la exactitud, precisión y reproducibilidad de sus resultados y respalda la próxima generación de técnicas mejoradas de manipulación de líquidos.
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