Thermo Scientific™ Conjunto de reactivos de etiqueta isobárica TMT10plex™

Descripción

TMT10plex Isobaric Label Reagents and Kits contain ten isobaric compounds with the same mass and chemical structure (i.e., isotopomeric) composed of an amine-reactive NHS-ester group, a spacer arm, and a mass reporter. Up to ten different peptide samples prepared from cells or tissues can be labeled in parallel and then combined for analysis. For each sample, a unique reporter mass (i.e., TMT10 126-131 Da) in the low-mass region of the high-resolution MS/MS spectrum is used to measure relative protein expression levels during peptide fragmentation and tandem mass spectrometry.

Los cambios en la expresión de las proteínas y las modificaciones postraslacionales son mecanismos esenciales de regulación biológica y de enfermedad. Los avances en la instrumentación de espectrometría de masas (MS), bioinformática y métodos de cuantificación, como la cuantificación sin etiquetas, etiquetado metabólico y marcado químico, permiten ahora a los investigadores identificar y analizar cuantitativamente miles de proteínas en una muestra dada con un alto grado de precisión.^{1, 2}
Las etiquetas químicas isobáricas son una herramienta poderosa que permite la identificación y cuantificación concurrentes de proteínas en diversas muestras mediante espectrometría de masas en tándem. Se trata de pequeñas moléculas químicas de estructura idéntica que realizan una unión covalente a los aminoterminales libres de residuos lisina de péptidos y proteínas, con lo que etiquetan varios péptidos de una muestra determinada. Durante el análisis de MS/MS, cada etiqueta isobárica produce una firma de ion marcador única que hace posible la cuantificación. En un análisis de MS típico, los péptidos etiquetados se distinguen entre sí. Sin embargo, en el modo MS tándem durante el cual los péptidos se aíslan y fragmentan, cada etiqueta genera un ion marcador único. La cuantificación de proteínas se logra comparando las intensidades de los seis iones marcadores en los espectros de MS/MS.

Características destacadas:

• Permite la identificación y cuantificación de proteínas a partir de múltiples muestras de células, tejidos o fluidos biológicos La química consistente permite una transición eficaz desde el desarrollo de los métodos hasta la cuantificación múltiple, lo que permite investigar la detección de biomarcadores Etiquetado eficaz de membranas y proteínas modificadas después de la traslación El sistema ampliable permite multiplexar simultáneamente hasta seis muestras diferentes en un solo experimento
• Fragmentación optimizada y cuantificación totalmente compatible con Proteome Discoverer 1.0 para todas las plataformas Thermo Scientific LC MS/MS, como los sistemas LTQ XL y LTQ Orbitrap XL
• Cada etiqueta TMT se basa en la misma estructura química, lo que elimina la necesidad de modificar las condiciones de etiquetado o las condiciones de separación de HPLC entre experimentos

Las etiquetas constan de juegos TMT₀, TMT₂ doble y TMT₆ séxtuplo

• La etiqueta TMT₀ permite realizar pruebas y optimizar la preparación de muestras, el etiquetado, el fraccionamiento y la fragmentación de MS para identificar péptidos y detectar informadores sin necesidad de utilizar los compuestos etiquetados isotópicos más costosos
• El juego de reactivos TMT₂ permite la creación de perfiles de proteínas dobles para estudios pequeños
• El juego de reactivos TMT₆ permite la creación de perfiles de proteínas de seis complejos para varias condiciones, como ciclos de tiempo, respuestas de dosis, réplicas o comparaciones de varias muestras

• Perfil de expresión de proteínas de estados normal frente a estado con enfermedad o de control frente a tratado
• Análisis cuantitativo de proteínas para las que no hay anticuerpos disponibles
• Identificación y cuantificación de membranas y proteínas modificadas después de la traslación