LanthaScreen™ Línea de células STAT1 U2OS

Descripción

• Símbolo de gen: STAT1
• Agonistas alternativos: IFN-gamma
• Antagonistas: IFN-alfa
• En esta vía, la unión de estas citocinas a sus respectivos receptores de superficie celular tiene como resultado la activación de los JAK, que a su vez fosfoactiva las proteínas STAT1 en un residuo específico de tirosina (Y701).
• LanthaScreen™ STAT1 U2OS es una línea de células humanas que expresa constitutivamente una proteína de fusión GFPSTAT1.
• Se sabe que la vía de señalización JAK/STAT1 está funcionalmente intacta en esta línea de células, por lo que la proteína de fusión GFP-STAT1 sirve como sustrato para la fosforilación inducible por IFN-gamma mediante JAK.
• Utilizando esta línea de células, se ha desarrollado un inmunoensayo homogéneo en el que se detecta el estado de fosforilación de GFP-STAT1 en lisados celulares utilizando un anticuerpo anti-pY701-STAT1 marcado con terbio, en una lectura FRET resuelta en el tiempo (TR-FRET).
• La construcción de expresión de ADN GFP-STAT1 se ha transfectado en células U2OS mediante el reactivo Lipofectamine™ LTX, seguido de la selección con blasticidina.
• Esta línea de células es una población clonal aislada por citometría de flujo que utiliza la fluorescencia GFP como marcador de clasificación.
• Utilizando el inmunoensayo de TR-FRET lítico, esta línea de células está validada para CE50 y los factores Zfi en condiciones optimizadas utilizando IFN-gamma como agonista de la fosforilación de GFP-STAT1 mediada por JAK.
• También se ha probado el rendimiento de este ensayo en condiciones experimentales variables, incluidos la densidad de la siembra en placa celular, el tiempo de estimulación, la tolerancia a DMSO y el tiempo de desarrollo del ensayo.