Invitrogen™ Kit de ensayo de coactivadores de PPAR alfa TR-FRET LanthaScreen™, conejo

Descripción

Este kit contiene anticuerpos Tb-anti-GST de conejo; otros componentes del kit son iguales a los del kit PV4684:

El kit de ensayo de coactivadores de PPAR (receptor activado por proliferadores de peroxisomas) alfa TR-FRET LanthaScreen™ proporciona un método sensible y robusto para la detección de alto rendimiento de los posibles ligandos de PPAR alfa como agonistas o antagonistas del reclutamiento de coactivadores. El kit utiliza un anticuerpo anti-GST marcado con terbio (Tb), un péptido coactivador marcado con fluoresceína y un dominio de unión a ligando de PPAR alfa humano recombinante (PPAR alfa-LBD) marcado con una etiqueta glutatión-S-transferasa (GST) en un formato de ensayo homogéneo para «mezclar y leer».

Modo agonista:
Cuando se realiza el ensayo de coactivadores de TR-FRET PPAR alfa LanthaScreen™ en modo agonista (para identificar compuestos agonistas), se añade PPAR alfa-LBD a los compuestos problema ligandos seguido de la adición de una mezcla de fluoresceína-péptido coactivador y anticuerpo anti-GST marcado con Tb. Después de un periodo de incubación a temperatura ambiente, se calcula la relación 520 nm/495 nm de TR-FRET y se puede utilizar para determinar la EC50 a partir de una curva de dosis-respuesta del compuesto. Basado en la biología de la interacción de PPAR alfa-péptido coactivador, esta EC50 del ligando es un valor compuesto que representa la cantidad de ligando necesaria para unirse al receptor, efectuar un cambio conformacional y reclutar el péptido coactivador (véase la figura 1).

Modo antagonista:
Cuando se realiza el ensayo de coactivadores de TR-FRET PPAR alfa LanthaScreen™ en modo antagonista (para identificar compuestos antagonistas), se añade PPAR alfa-LBD a los compuestos problema ligandos seguido de la adición de una mezcla de agonista, fluoresceína-péptido coactivador y anticuerpo anti-GST marcado con Tb (figura 2). La concentración de agonista que se utiliza en este modo es la concentración CE80 determinada por la primera realización del ensayo en modo agonista.

Contenido y almacenamiento:
El kit de ensayo de coactivadores de TR-FRET PPAR alfa LanthaScreen™ contiene la proteína PPAR alfa-LBD (GST), péptido coactivador PGC1a marcado con fluorescencia, anticuerpo anti-GST marcado con Tb y tampones. Almacenar los componentes como se indica en el protocolo del ensayo (– 80 °C, –20 °C o 4 °C).