Thermo Scientific™ PagI (BspHI) (10 U/μL)

Descripción

ADN lambda digerido con PagI (BspHI), agarosa al 0,7 %, 3 sitios de escisión

Las endonucleasas de restricción convencionales representan una gran colección de enzimas de restricción de alta calidad, optimizadas para funcionar en uno de los tampones del sistema de cinco tampones. Además, se proporciona el tampón universal Tango para mayor comodidad en digestiones dobles. Todas las enzimas muestran una actividad del 100 % en las condiciones de reacción y tampón recomendadas. Para garantizar uniformidad en el rendimiento, los tampones de enzimas de restricción Thermo Scientific contienen BSA previamente mezclada, lo que mejora la estabilidad de numerosas enzimas y fija sustancias contaminantes que pueden estar presentes en preparaciones de ADN.

5'...T▵C A T G A...3'

3'...A G T A C▵T...5'

Condiciones para una actividad del 100 %:

• 1 tampón O: 50 mm de Tris-HCl (pH 7,5 a 37 °C), 10 mm de MgCl₂, 100 mm de NaCl y 0,1 mg/ml de BSA
• Incubar a 37 °C.

Tampón de almacenamiento:

• Pagl se suministra en: 10 mm de Tris-HCl (pH de 7,4 a 25 °C), 100 mm de nacl, 1 mm de DTT, 1 mm de EDTA, 0,2 mg/ml de BSA y 50 % (v/v) de glicerol

Ligadura y refragmentación:

• Tras una sobredigestión con 50 veces la cantidad recomendada de PagI, más del 95 % de los fragmentos de ADN pueden ligarse y recortarse

Efectos de metilación:

• Dam: puede solaparse, reducción de fragmentación.
• Dcm: nunca se solapa, sin efecto.
• CpG: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoKI: nunca se solapa, sin efecto.
• EcoBI: puede solaparse, reducción de fragmentación

Digestión del ADN integrado en agarosa:

• Se requieren como mínimo 5 unidades de la enzima para la digestión completa de 1 μg de ADN lambda integrado en agarosa en 16 horas

Extremos compatibles:

• AflIII, PscI, DsaI, Eco130I, NcoI

Nota:

La concentración baja de sales, la concentración alta de glicerol (> 5 %), un pH >8 o un gran exceso de la enzima pueden producir actividad estrella (star activity). La fragmentación con PagI se reduce debido a la metilación de dam solapante. Para evitar metilación dam, utilice una cepa con dam-, dcm-, como GM2163 (M0099).