Invitrogen™ Cells-to-cDNA™ II Kit

Descripción

El kit Ambion Cells-to-cDNA™ II (patente pendiente) produce ADNc a partir de células de mamíferos cultivadas en menos de dos horas. No se requiere aislamiento de ARN. Este kit es ideal para quienes deseen realizar reacciones de transcripción inversa en pequeñas cantidades de células, numerosas muestras de células, o para científicos que no están familiarizados con el aislamiento de ARN.

• No se requiere purificación de ARN
• De células en cultivo a ADNc en menos de dos horas
• Detecte mensajes raros en una sola célula
• Ideal para laboratorios que no estén equipados para aislamiento de ARN

Ideal para aplicaciones de RT-PCR
El kit Cells-to-cDNA II (pendiente de patente) integra inactivación de ARNasa y tratamiento de DNasa I en un tampón de lisis celular compatible con RT-PCR, eliminando el aislamiento de ARN por completo. La mayoría de los tampones de lisis celular contienen desnaturalizantes fuertes que si se llevan a las reacciones enzimáticas inhibirían o inactivarían la mayoría de las enzimas. Si se utiliza un tampón de lisis sin desnaturalizantes fuertes, la ARNasa endógena puede degradar rápidamente el ARN celular. El kit Cells-to-cDNA II contiene un novedoso tampón de lisis celular que inactiva ARNasas endógenas sin comprometer las reacciones enzimáticas posteriores. Después de la inactivación de las ARNasas, el lisado celular puede añadirse directamente a una reacción de síntesis de ADNc. Cells-to-cDNA II es compatible con protocolos RT-PCR de un paso y de dos pasos.
Cuantitativo: resultados lineales cuantitativos y ausencia de contaminación por ADN detectable
Para ilustrar la respuesta cuantitativa y lineal de Cells-to-cDNA II a las variaciones en el número de células de entrada, se realizó un experimento cuantitativo de RT-PCR en tiempo real utilizando el sistema de detección de secuencias ABI 7700. El trazado del umbral de ciclo (CT) frente a la concentración celular para la GAPDH produjo una curva estándar con una correlación de 0,99. Por lo tanto, Cells-to-cDNA II produce resultados lineales para 1 a 10 000 células/μl en un ensayo RT-PCR en tiempo real de dos pasos. También debe tenerse en cuenta que el control de PCR con plantilla negativa para el experimento de la GAPDH fue negativo, lo que indica la eliminación completa del ADN genómico.
Procedimiento simple
El kit incluye todo lo que necesita para pasar de células cultivadas a ADNc preparado para PCR en menos de dos horas; no se requiere aislamiento de ARN. Primero, las células se lavan con PBS y luego se resuspenden en el tampón de lisis celular. Un calentamiento breve lisa las células simultáneamente e inactiva las ARNasas. A continuación, se realiza una digestión opcional de la ADNasa para degradar el ADN genómico, seguida de un paso de inactivación por calor. Una fracción del lisado celular se utiliza en una reacción de transcripción inversa con los reactivos incluidos.
Productos accesorios:
Se recomienda la ADN polimerasa termoestable SuperTaq™, disponible por separado (n.º cat. AM2050 y AM2052). Para la amplificación óptima de fragmentos superiores a 1 kb, utilice la ADN polimerasa Taq termoestable SuperTaq Plus (n.º cat. AM2054 y AM2056).

PCR y PCR en tiempo real, PCR en tiempo real (qPCR), PCR en tiempo real directamente a partir de muestras, transcripción inversa, síntesis de ADNc directa a partir de células

Información de órdenes

Condición de envío:Hielo seco