Invitrogen™ Sistema de síntesis de primera cadena SuperScript™ IV

Descripción

Optimizado para la síntesis de ADNc de primera cadena a partir de poli(A)+ purificado o ARN total.

• El kit incluye la transcriptasa inversa SuperScript IV (RT), un mutante MMLV patentado que produce una síntesis sólida y fiable de ADNc en reacciones de transcriptasa inversa, y DNAasa ez para eliminar la posible contaminación de ADN genómico
• El sistema ha mejorado ostensiblemente en comparación con el sistema basado en SuperScript III en resistencia al inhibidor, capacidad de procesamiento y velocidad de reacción, al tiempo que conserva todas las ventajas del sistema anterior, incluido el aumento de la termoestabilidad, la síntesis de ADNc de longitud completa altamente eficaz y la reducción de la actividad de ARNasa
• Diseñada para proporcionar una síntesis fiable, uniforme y rápida de ADNc en presencia de inhibidores que se encuentran en una amplia variedad de muestras, lo que hace que otras RT disponibles actualmente resulten ineficaces.
• Contiene todos los componentes necesarios para las reacciones de transcriptasa inversa, además de un gen de control adicional y cebadores, y proporciona flexibilidad para personalizar la configuración de la transcriptasa inversa
• Se incluye la DNAasa ez para la extracción del ADN genómico
• El paso de eliminación de ADN genómico simplificado reduce considerablemente el tiempo de todo el protocolo de transcripción inversa y reduce la variación posible en la expresión génica debido a la pérdida de ARN o de daños durante el tratamiento convencional con ADNasa
• Ideal cuando la reproducibilidad y la fiabilidad son el principal objetivo y cuando los inhibidores de la muestra de ARN pueden interferir en la síntesis de ADN complementario, lo que provocaría sesgos en los estudios de expresión génica
• Mejora de la resistencia a una gran variedad de inhibidores que pueden interferir con la síntesis de ADNc
• Síntesis de ADNc sólida y específica en una amplia gama de tipos de muestras
• Reacción más rápida de la transcriptasa inversa que reduce el tiempo de incubación desde >50 min a 15 min, incluida la eliminación simplificada del ADN genómico

Fuente de la enzima
Purificada a partir de E. coli que expresa el gen pol de M-MLV, modificada para aumentar la termoestabilidad, la semivida, la capacidad de procesamiento y la resistencia a inhibidores, así como para reducir la actividad de la ARNasa H.

Pruebas de rendimiento y calidad
Ensayos de exodesoxirribonucleasa, endodesoxirribonucleasa y ribonucleasa; y producción y longitud del producto ADNc.

Definición de unidad
Una unidad de transcriptasa inversa SuperScript IV es la cantidad de enzima necesaria para incorporar 1 nmol de desoxirribonucleótido en material precipitable en ácido en 10 min a 37 °C mediante poli(A)oligo(dT)_12-18 como molde/cebador.

Condiciones de reacción de la unidad
50 mm de Tris-HCl (pH 8,3), 4 mm de MgCl², 10 mm de DTT, 50 mm de KCl, 0,5 mm de dTTP, 0,4 MBq/ml [³H]-dTTP, 0,4 mm de poli(A) oligo (dT)_12-18 y enzima en 20 μl durante 10 min a 37 °C