Invitrogen™ Glutathione Fluorescent Detection Kit

Descripción

El kit de detección de glutatión (para uso exclusivo en investigación) es un ensayo fluorescente y está diseñado para la detección y cuantificación de glutatión en muestras de sangre completa, suero, plasma, eritrocitos, orina, lisados celulares y tejidos.

Este kit completo y listo para usar incluye placas negras de 96 pocillos, estándar de glutatión, reactivos de detección, tampón de ensayo y otros componentes para realizar el ensayo. Para utilizar este kit se necesita un lector de microplacas de 96 pocillos capaz de leer la emisión fluorescente a 510 nm, con excitación a 390 nm.

Características de rendimiento
• Tipo de ensayo: kit de detección fluorescente
• Tipos de muestras: sangre completa, suero, plasma, eritrocitos, orina, lisados celulares y tejidos
• Sensibilidad: 45 nm
• Intervalo de curva estándar: 0,2–25 μM
• Reactividad: independiente de la especie

Antecedentes
El glutatión (GSH) es la concentración más alta de tiol no proteico en células de mamíferos y está presente en concentraciones de 0,5 a 10 mm. El GSH desempeña un papel clave en muchos procesos biológicos, incluida la síntesis de proteínas y ADN, el transporte de aminoácidos y la protección de las células frente a la oxidación. La enzima glutatión peroxidasa (GP) minimiza los niveles celulares de peróxido de hidrógeno nocivo mediante el uso del GSH como reductor. El dímero de GSH oxidado (GSSG) se forma a partir del GSH y peróxido mediante la reacción de la GP.

El hecho de que el potente inductor del NF-κB, el tetradecanoílo forbol acetato, aumente los niveles intracelulares de GSSG y la relación GSSG/GSH, sugiere que el GSSG desempeña un papel importante en la cascada de señales de activación del NF-κB. La glutatión S-transferasa (GST) es un importante grupo de enzimas que cataliza la adición nucleofílica de GSH a los electrófilos. Están codificados por 5 familias de genes; 4 codifican GST citosólica y uno codifica la forma microsomal de la GST.

Principio del ensayo
El kit de detección fluorescente de glutatión está diseñado para medir cuantitativamente el glutatión (GSH) y el glutatión oxidado (GSSG) presente en una variedad de muestras. La exclusividad de este kit se basa en el hecho de que tanto el glutatión libre como el oxidado se detectan en el mismo pocillo de la placa microtituladora. No se requiere separación ni lavado. El glutatión total es la suma del GSSG más el GSH. Se proporciona un estándar de GSH para generar una curva estándar para el ensayo y todas las muestras deben leerse en la curva estándar. El kit utiliza un reactivo de detección no fluorescente patentado que se fija mediante un enlace covalente al grupo de tiol libre del GSH, lo que genera un producto altamente fluorescente. Una vez que la muestra o el estándar se mezclan con el reactivo de detección y se incuba a temperatura ambiente durante 15 minutos, el producto fluorescente se lee a 510 nm en un lector de placas fluorescentes con excitación a 390 nm. El glutatión libre (GSH) se lee primero pasados los 15 minutos. Posteriormente, se añade una mezcla de reacción que convierte todo el glutatión oxidado (GSSG) en GSH libre, que luego reacciona con el exceso de reactivo de detección y produce la señal relacionada con el contenido total de GSH. La concentración total de GSH generada en la muestra se calcula a partir de la señal generada.