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Invitrogen™ Cells-to-cDNA™ II Kit
No se requiere aislamiento de ARN
896.00€ - 1662.00€
Especificaciones
Contenido y almacenamiento | El 1X PBS, tampón de lisis celular II, µl DNasa 1, tampón 10X RT, transcriptasa inversa M-MLV, inhibidor de la ARNasa, mezcla dNTP, decámeros aleatorios, cebadores Oligo(DT) 18, control de ARN™ blindado, par de cebadores de ARN™ blindado y par de cebadores endógenos deben almacenarse a –20 °C. El agua sin nucleasas puede almacenarse a cualquier temperatura. |
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Temperatura óptima de reacción | de 42 °C |
Línea de productos | Ambion™, Cells-to-cDNA™ |
Tiempo de purificación | 2 h |
Transcriptasa inversa | M-MLV |
Código de producto | Marca | N.º de reacciones | Precio | Cantidad y disponibilidad | |||||
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Código de producto | Marca | N.º de reacciones | Precio | Cantidad y disponibilidad | |||||
10600036
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Invitrogen™
AM1722 |
40 reacciones |
896.00€
cada uno |
Fecha estimada de envío: 14-05-2024 Inicie sesión para ver el stock |
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10273644
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Invitrogen™
AM1723 |
100 reacciones |
1662.00€
100 reacciones |
En stock Inicie sesión para ver el stock |
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Descripción
El kit Ambion Cells-to-cDNA™ II (patente pendiente) produce ADNc a partir de células de mamíferos cultivadas en menos de dos horas. No se requiere aislamiento de ARN. Este kit es ideal para quienes deseen realizar reacciones de transcripción inversa en pequeñas cantidades de células, numerosas muestras de células, o para científicos que no estén familiarizados con el aislamiento de ARN.
- No requiere purificación de ARN
- De células en cultivo a ADNc en menos de dos horas
- Detecte mensajes raros en una sola célula
- Ideal para laboratorios que no estén equipados para aislamiento de ARN
El kit Cells-to-cDNA II (pendiente de patente) integra inactivación de RNasa y tratamiento de DNasa I en un tampón de lisis celular compatible con RT-PCR, eliminando el aislamiento de ARN por completo. La mayoría de los tampones de lisis celular contienen desnaturalizantes fuertes que si se llevan a las reacciones enzimáticas inhibirían o inactivarían la mayoría de las enzimas. Si se utiliza un tampón de lisis sin desnaturalizantes fuertes, la RNasa endógena puede degradar rápidamente el ARN celular. El kit Cells-to-cDNA II contiene un novedoso tampón de lisis celular que inactiva RNasas endógenas sin comprometer las reacciones enzimáticas posteriores. Después de la inactivación de las RNasas, el lisado celular puede añadirse directamente a una reacción de síntesis de ADNc. Cells-to-cDNA II es compatible con protocolos RT-PCR de un paso y de dos pasos.
Cuantitativo: resultados lineales y ausencia de contaminación por ADN detectable
Para ilustrar la respuesta cuantitativa y lineal de Cells-to-cDNA II a las variaciones en el número de células de entrada, se realizó un experimento cuantitativo de RT-PCR en tiempo real utilizando el sistema de detección de secuencias ABI 7700. El trazado del umbral de ciclo (CT) frente a la concentración celular para la GAPDH produjo una curva estándar con una correlación de 0,99. Por lo tanto, Cells-to-cDNA II produce resultados lineales para 1 a 10 000 células/μl en un ensayo RT-PCR en tiempo real de dos pasos. También debe tenerse en cuenta que el control de PCR con plantilla negativa para el experimento de la GAPDH fue negativo, lo que indica la eliminación completa del ADN genómico.
Procedimiento simple
El kit incluye todo lo que necesita para pasar de células cultivadas a ADNc preparado para PCR en menos de dos horas; no se requiere aislamiento de ARN. Primero, las células se lavan con PBS y luego se resuspenden en el tampón de lisis celular. Un calentamiento breve lisa las células simultáneamente e inactiva las ARNasas. A continuación, se realiza una digestión opcional de la ADNasa para degradar el ADN genómico, seguida de un paso de inactivación por calor. Una fracción del lisado celular se utiliza en una reacción de transcripción inversa con los reactivos incluidos.
Productos accesorios:
Se recomienda la ADN polimerasa termoestable SuperTaq™, disponible por separado (n.º cat. AM2050 y AM2052). Para la amplificación óptima de fragmentos superiores a 1 kb, utilice la ADN polimerasa Taq termoestable SuperTaq Plus (n.º cat. AM2054 y AM2056).
PCR y PCR en tiempo real, PCR en tiempo real (qPCR), PCR en tiempo real directamente a partir de muestras, transcripción inversa, síntesis de ADNc directa a partir de células
Información de órdenes
Condición de envío:Hielo seco
Especificaciones
El 1X PBS, tampón de lisis celular II, µl DNasa 1, tampón 10X RT, transcriptasa inversa M-MLV, inhibidor de la ARNasa, mezcla dNTP, decámeros aleatorios, cebadores Oligo(DT) 18, control de ARN™ blindado, par de cebadores de ARN™ blindado y par de cebadores endógenos deben almacenarse a –20 °C. El agua sin nucleasas puede almacenarse a cualquier temperatura. |
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Ambion™, Cells-to-cDNA™ | |
M-MLV | |
PCR en tiempo real (PCRq), RT-PCR | |
Células de mamíferos |
de 42 °C | |
2 h | |
Hielo seco | |
ADNc | |
7 kb o menos |
Para uso exclusivo en investigación.No apto para uso en procedimientos diagnósticos.